禽白血病病毒抗原检测试剂盒

组份

1 预包被板条 1/2块 7 阴性对照 2ml

2 酶结合物 11/22ml 8 阳性对照 2ml

3 25倍浓缩洗刷液 30/60ml 9 封板膜 2/4张

4 底物A液 8/16ml 10 阐明书 1份

5 底物B液 8/16ml      

6 停止液 6/11ml      

本试剂盒用于禽白血病病毒 P27 抗原的检测。 本试剂盒是选用双抗体夹心酶联免疫吸附实验（DAS-ELISA）原理来检测禽白血病病毒的P27抗原。检测时，在相应的反响孔中参加阴、阳对照品和待测样品，经温育后，若样品中含有P27抗原，则与酶标板上的抗体结合构成抗原抗体复合物，反之则不能结合。洗刷后，参加的酶符号物与包被板上的抗原抗体复合物发作特异性结合。再次洗刷后参加底物，酶催化底物反响呈现蓝色，色彩深浅与样品中P27抗原的含量成正相关，然后到达快速检测的意图。

需自备的设备及试剂

酶标仪（650 nm）、去离子水、离心管、微量移液器、计时器、离心机（4000r/min）、棉签、氯化钠、  、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾等。

注意事项

  本品仅供体外检测运用。

  不同批号试剂盒中的组份不行混用。

勿运用过期的试剂盒，已开封的组份应在有用期内       运用。

有必要运用契合药典规则的水（如蒸馏水、去离子水或纯水）稀释洗刷液。

试剂盒各组份在运用前应预先平衡至室温（25±2℃）。

未运用的酶标板应放回铝箔袋并封口，2-8℃保存。

应防止运用金属类物质盛装和拌和试剂。

勿将底物溶液露出于强光下。

本品停止液为强酸，防止同眼、皮肤触摸。

移液体系应确保精确清洁，应供给精确溶液体积的一起不形成穿插污染。

操作办法

一：试剂制造

a）0.01 mol/L pH=7.4 PBS 溶液：精确称取氯化钠 8.0 g、   0.2 g、磷酸氢二钠1.14 g和磷酸二氢钾0.24 g，参加去离子水溶解并定容至1 L。

b）洗刷工作液：运用前，浓缩的洗刷液应康复至室温（20-25℃），并摇摆，使沉积溶解（*在37℃恒温培养箱中加热5-10 min），然后用蒸馏水作25 倍稀释（例如：30 mL 的浓缩洗刷液加上 720 mL 蒸馏水）匀，稀释好的洗刷液2-8℃可寄存7日。

二：样品处理

蛋清：取全蛋，破碎后，直接取蛋清100μL。 泄殖腔拭子：取棉签于待检鸡只泄殖腔取样，然后放入1 mL PBS溶液（0.01mol/L，pH 值 7.4）中，-20℃以下冰箱中冻融一次，待其康复至室温后，取 100 μL 进行检测。 疫苗：疫苗稀释液将疫苗溶解，再用0.01 mol/L pH=7.4 PBS稀释10-20倍后，取100μL进行检测。 胎粪：无需稀释，能够直接用于检测，若样品中含有沉积或杂质，需在2000-3000 r/min，离心 10 min，取 100 μL 上清进行检测。

三：操作过程

取酶标板（依据样品*，可拆开分次运用），阴性对照、阳性对照和待检样品各取100 μL加至相应微孔中，盖好盖板膜，悄悄振动酶标板10 s，充沛混

匀，室温下（25±2℃）避光反响60 min。

注：阴、阳性对照各设2孔，待检样品设1孔。

甩掉孔中的溶液，每孔参加稀释好的洗刷液300μL，震动洗刷4次，每次30s 左右，在洁净吸水纸上敲打去除残存洗刷液。 每孔参加100μL酶符号物工作液，盖好盖板膜，室温下（25±2℃）避光反响60 min。 弃去孔中的溶液，洗刷4次，办法同2。 底物A液与底物B液按1:1混合均匀，参加孔中，100 μL/孔，盖上盖板膜，室温下（25±2℃）反响15 min。

注：底物工作液也可提早制造，但制造完后需5 min内运用。

每孔参加停止液100μL，5 min内测定成果。

注：若停止液呈现絮状结晶，可37℃加热，待其溶解后运用。

成果断定

在酶标仪上读各孔OD650nm值，计算出阴性对照孔OD均值NC和阳性对照孔OD均值PC。

注：NC值＜0.200且0.500＜PC值≤2.000，实验成果才有用。不然，应进行重复实验。

依照公式计算出S/P值：S/P=（SC-NC）/（PC-NC）。

注：SC为被检样品孔OD值。

假如S/P＜0.17，阐明样品中无禽白血病病毒P27蛋白；假如S/P≥0.17，阐明样品中有禽白血病病毒P27蛋白。

有用期

储存办法： 2 - 8oC下储存。

有用期： 12个月。

禽白血病是由禽C型反录病毒群的病毒引起的禽类多种肿瘤性疾病的总称，主要是淋巴细胞性白血病，其次是成红细胞性白血病、成髓细胞性白血病。此外还可引起骨髓细胞瘤、结缔安排瘤、上皮肿瘤、内皮肿瘤等。大多数肿瘤损害造血体系，少量损害其他安排