猪流感抗体检测试剂盒

检测原理

LSI 猪流感抗体检测试剂盒（CIVTEST SUIS Influenza）是利用间接ELISA 方法建立的。特异的猪流感病毒被包被在96 孔板上。在反应过程中，检测样本被加入反应孔中，样本中的特异性抗体会与孔中包被的特异性抗原反应，在洗板的过程中不会被清洗掉，当添加酶标复合物时，这些酶标复合物就会与猪的抗体发生反应。没有结合的酶标复合物在洗板的过程中被清洗。在加入对氧化酶敏感的可以显色底物。显色的颜色深浅与样本所含猪流感病毒的抗体浓度成正比。

Kit Composition (enough for 460 test)

包被猪流感抗原的96 孔板. 5

Vial No0: 洗液(x10). 250 ml

Vial No1: 绿色的样本稀释液(x3) 100 ml

Vial No2:酶标复合物:红色的标记HRPO 的单*抗猪LgG 抗体. 可直接使用30 ml

Vial No3: 底物: ABTS. 可直接使用。30 ml

Vial No4: 底物终止液: 稀草酸. 可直接使用. 30 ml

Vial No5: 阳性对照: 黄色的阳性血清. 可直接使用. 2.2 ml

Vial No6: 阴性对照: 蓝色的阴性血清. 可直接使用. 2.2 ml

覆盖膜5

说明书1

质检证书. 1

在试剂盒的液体中使用了硫柳*等防腐剂。

必需的但没提供的设备

37℃温箱精确移液器用于稀释的容器酶标仪灭菌或去离子水冲洗用具

用前准备：

仔细阅读说明书，所有试剂在2-8℃条件下保存。不用时，所有的板条一定要用用封口膜密封，并存放在封口的塑料小袋中，防止潮气对包被板的损伤。尽管在生产过程中，包被的抗原已经被灭活，但包被的抗原仍被视为病毒的潜在来源。不要使底物接触强光和氧化物。ABTS是一种敏感度很高的底物，取出后，不得再加回瓶中，试剂瓶中已多备了25%的试剂，完全够用。不要使用过期的成分或者不同批次试剂混合使用成分。注意加样和冲洗，以确保试验的精确度和准确度。不能用嘴吸液。操作过程中使用手套，终止液是一种有机酸，具有腐蚀性，使用时要小心。所有的废液要经过处理和净化。本品为兽用产品。

如果正确保存，没有打开的试剂，在到达标签指示的有效期时，也是很稳定的。

检测过程

试剂的准备：

所有的试剂在使用前，必须回温到室温。

洗液（10X）：取1份清洗液加入9 份的灭菌水或去离子水中（如要配200ul的稀释液清洗液，可取20ul 的浓缩液加入180ul的灭菌水或去离子水）。配好的液体，我们推荐在7 天内用完。

样本稀释液（3X）：配制时用1体积的样稀释液中加入2 倍体积德的蒸馏水或者去离子水。（例如配制60ml 的样本稀释液, 可以取20ml 样本稀释液, 再加入40ml 的蒸馏水或者去离子水）配好的液体，我们推荐在2 天内用完。

注意：清洗液由于盐分高可能结晶，使用前必须摇匀溶解。需要整瓶试剂，可以利用反复颠倒混匀溶解。如果使用部分试剂，需要在室温或者在28-37℃水浴条件下10-15 分钟，将结晶溶解后，再配稀释液。为了避免形成结晶，清洗液可保存在到室温条件下。

B，样本的准备

阳性对照，阴性对照已经准备好,不必稀释, 样本需要用样本稀释液进行200倍稀释，如果利用多道加样器和96孔板进行稀释,推荐使用以下步骤:先吸取5ml 的样本加入95ml 的样本稀释液中,混匀.再吸取5 ml 稀释了20 倍的液体加入ELISA 反应板孔,再加入45ml 的样本稀释液.

C．操作步骤：

A，将试剂放在室温，并轻摇混匀

B，将样本和对照加入板孔中。阳性对照和阴性对照必须是双份。

1，加入50ul 阳性和阴性对照，及200 倍稀释的样品在反应板孔.。

2, 盖上膜,在37℃作用60 分钟

3, 去膜,用300ul 的洗液洗3 遍,并在吸水纸上将平板弄干(颠倒,在纸上轻敲),

4, 在每个孔中加入50ul 酶标抗体

5, 盖上膜在37℃反应60 分钟

6, 去掉膜,用洗液(300ul)洗3 次,弄干

7, 加入50ul 的底物,轻摇板2 秒

8，将平板放在黑暗中在20-25℃作用15 分钟

9, 加入50ul 的终止液,轻敲平板混匀

10,用柔软的东西轻拭平板上的脏物,在405nm 下读数并记录结果

读数

A. 实验成立条件：

阳性对照OD450 > 0.7，而且阳性对照平均值/阴性对照平均值> 5.5.

B. 结果的解释

结果用IRPC 表示,. 以下是计算公式