一、 试验材料

1、 6孔110°微量血凝板。

2、 10-100微升可调微量移液器

3、 塑料咀

4、 口蹄疫O型正向间接血凝抗原（口蹄疫O型正向血凝诊断液），每瓶5毫升，可检测血清25-30头份。

5、 阳性对照血清，每瓶0.5毫升；阴性对照血清每瓶0.5毫升

6、 稀释液每瓶50毫升

7、 待检血清每份0.2-0.5毫升（56℃水浴灭活30分钟）

二、 操作步骤

1、 检测前，应将试剂盒从冰箱中拿出回温到室温，并且将抗原液摇匀。

2、 稀释待检血清：在血凝板上的第一孔――第六孔各加稀释液50ul，待检血清加入第一孔，混匀后从中取出50ul加入第二孔，依此类推直至第六孔混匀后丢弃50ul，从第一孔――第六孔的血清稀释度依次为1：2、1：4、1：8、1：16、1：32、1：64。

3、 稀释阴性血清和阳性血清：在血凝板上的*1排*孔加稀释液50ul，取阴性血清50ul混匀

后取出50ul丢弃。此孔即为阴性血清对照孔。

在血凝板上的*2排*孔加稀释液50ul，第2孔――第7孔各加稀释液50ul 。吸取阳性血清50ul，加入*孔混匀并从中取出50ul加入第2孔……直到第7孔混匀并丢弃50ul。第七孔的阳性血清稀释度则为1：512。

4、 在血凝板上的*排第8孔加稀释液50ul即为稀释液对照孔。

5、 滴加抗原：*排1－8孔和对照孔各加血凝抗原25ul立即置微量震荡器上震荡1分钟，或用手

摇匀。室温下静置2-3小时后判断结果，也可于次日判断结果。

6、 判定方法和标准：先观察阴性血清对照好和稀释液对照孔，红血球应全部沉入孔底，无凝集现象（－）或呈阳性（+）的轻度凝集为合格；阳性血清对照应呈(+++)凝集为合格。

在以上3孔对照合格的情况下，观察待检血清各孔的凝集程度，以呈“++”凝集的待检血清*稀释度

为血凝效价（血凝价）。血清的血凝价达到1：16为免疫合格。

“－”表示红血球100％沉于孔底，完全不凝集

“+”表示约有25％的红血球发生凝集

“++”表示50％红血球出现凝集

“+++”表示75％红血球凝集

“++++”表示90-100％红血球凝集

7、 注意事项

（1） 勿用90°或130°血凝板，以免误判。

（2） 污染严重或溶血严重的血清样品不宜检测。

（3） 冻干血凝抗原，必须加稀释液浸泡7－10天，方可使用，否则易发生自凝现象。

（4） 用过的血凝板，应及时冲洗干净，勿用毛刷或其它硬物刷洗板孔，以免影响孔内光洁度。

（5） 使用血凝抗原时，必须充分摇匀，瓶底应无血球沉积。

（6） 液体血凝抗原4-8℃贮存，有效期4个月。

（7） 如来不及判定结果或静置2小时结果不清晰，也可放置第二天判定。

（8） 每次检测，只设阴性、阳性血清和稀释液对照各1孔。

（9） 稀释不同的试验要素时，必须更换塑料咀。

（10） 血凝板洗净后，自然干燥，可重复使用。