检测原理

    本试剂盒由预包被口蹄疫A型病毒重组抗原的酶标板、酶标单抗及其他配套试剂组成，应用阻断法原理检测血清或血浆样本中口蹄疫A型病毒抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本，再加入酶标单抗工作液，经温育后若样品中含有口蹄疫A型病毒抗体，则阻断酶标单抗工作液中的单克隆抗体与酶标板中包被的抗原结合，经洗涤除去未结合的其他成分后；再加入酶标单抗，温育后经洗涤除去未结合的酶标单抗，在孔中加TMB底物液，与酶标结合物反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成负相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有口蹄疫A型病毒抗体。

试剂盒组成

储存及有效期

2～8℃保存，有效期12个月。

包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。

适用仪器

含450nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。

样品准备

1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。

2.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液(如19份蒸馏水或去离子水加1份浓缩洗涤液)。

检验方法

1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。

2.根据待检样本数量取所需板条，每孔中加入样本稀释液75ul，再加入待检血清25ul。

3.阴性、阳性对照孔分别加入阴性、阳性对照100μl；

4.混匀，盖好盖板膜，置37℃温箱孵育30分钟。

5.甩去孔内液体，每孔加满工作洗涤液，用震荡的方式洗涤酶标板60秒后弃去工作洗涤液，重复洗涤5次，最后一次拍干板孔中液体。

6.每孔加酶抗体工作液100μl。

7.置37℃避光反应30分钟。

7.甩去孔内液体，每孔加满工作洗涤液，用震荡的方式洗涤酶标板60秒后弃去工作洗涤液，重复洗涤5次，最后一次拍干板孔中液体。

8.根据样本数量将显色液A与显色液B按等体积比例混匀配置为底物工作液，现配现用。每孔加100ul，置37℃避光反应10分钟。

9.每孔加终止液100μl，混匀，于450nm 测定各孔吸光值（OD值），

参考值

实验正常的情况下，阴性对照OD＞0.5，同时阳性对照OD＜0.5×阴性对照OD

检验结果的解释

1. 根据实验得到的阴性对照OD值，计算出阳性临界OD值和阴性临界OD值。

2. 阳性临界OD=0.5×阴性对照OD；阴性临界OD=0.6×阴性对照OD。

3. 样本OD＜阳性临界OD时，结果判读为阳性。

4. 阳性临界OD≤样本OD≤阴性临界OD时，样本可能存在抗体效价不足或疑似感染。

5. 样本OD＞阴性临界OD时，结果判读为阴性。

试验方法的局限性

1. 本试剂盒仅作为定性检测血清或血浆中口蹄疫A型病毒抗体的粗略评估。

2. 本试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验。

注意事项

1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。

2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。

3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。

4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以完全溶解。

5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。

6.用于检测的样品应保持新鲜。

7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。

8.不同批号试剂组分不得混用。